細胞嵌入皿常見(jiàn)問(wèn)題

如何選擇嵌入皿小室產(chǎn)品的孔徑？

首先需要明確您所進(jìn)行的應用是否需要細胞穿過(guò)小室膜上的孔。一般來(lái)說(shuō)，共培養實(shí)驗、Caco-2 Transport實(shí)驗及構建細胞極化模型等不需要細胞穿膜，大多選擇0.4μm等小孔徑的產(chǎn)品。而在細胞遷移實(shí)驗及侵襲實(shí)驗中，細胞則需要穿過(guò)上室的膜、到達膜的背側（少數情況下會(huì )落至下室中，如懸浮細胞的遷移/侵襲實(shí)驗），因此需要選擇較大孔徑，（如腫瘤細胞的遷移、侵襲實(shí)驗常選擇8μm孔徑的產(chǎn)品）。

如何挑選小室膜的材質(zhì)？

潔特小室有聚碳酸酯（Polycarbonate, PC），聚酯（Polyesteror PolyethyleneTerephthalate，PET）兩種膜材質(zhì)。

PC和PET膜材質(zhì)應用都很廣泛，二者的主要區別在光透性方面，即PC膜半透明，不太方便在培養的過(guò)程中觀(guān)察上室細胞的形態(tài)；PET膜透明，方便在相差顯微鏡下觀(guān)察細胞的狀態(tài)。

另外，在0.4μm孔徑下，PC膜和PET膜的孔密度（單位面積上的孔數量）不同，PC膜提供更高的膜孔密度。您可根據對實(shí)驗的要求（是否需要觀(guān)察細胞狀態(tài)，是否需要更高孔密度的膜）來(lái)選擇。

小室的膜材質(zhì)與細胞培養皿/瓶不同，細胞貼壁情況會(huì )有什么差異嗎？

未包被的小室膜材質(zhì)（PC或PET）雖與普通塑料細胞培養皿/瓶的材質(zhì)（Polystyrene, PS）不同，但膜的兩側均經(jīng)過(guò)組織培養表面處理（TissueCulture Treated, TC Treated），與一般做細胞培養的PS耗材的表面處理相同。因此，在正常情況下，細胞在小室內的貼壁情況應與培養皿/瓶中類(lèi)似。在普通培養時(shí)需包被基質(zhì)蛋白等輔助貼壁的細胞，在小室上仍然需要包被。包被方法類(lèi)似普通培養表面，可通過(guò)小室膜表面積換算所需包被液的量

小室產(chǎn)品可否滅菌后重復使用？

小室產(chǎn)品為一次性使用的耗材，不可重復使用。小室的孔板和膜的材質(zhì)均無(wú)法承受高壓蒸汽滅菌，且無(wú)法確認重復使用的小室是否被徹底清潔，因此無(wú)法保障重復使用的實(shí)驗效果。

嵌入皿小室是否需要匹配特殊的接收板/下室產(chǎn)品?

與相應規格的普通細胞培養多孔板（如TCP010006、TCP010012、TCP010024等）適配。

在接種細胞前，是否需要進(jìn)行“水化”？

大多數應用并不需要額外進(jìn)行“水化”操作，該操作主要用于Matrigel預包被的侵襲小室，在使用前需平衡至室溫，并加入預溫至37攝氏度的無(wú)血清培養基，于培養箱中水化兩小時(shí)。

少數情況下，提前在上下室加入培養基，并在培養箱中預孵育大于1小時(shí)可幫助細胞貼壁，但大多數細胞可以直接接種。

接種細胞的加液順序如何？

一般先將預熱的培養基加入多孔板的孔中（下室），再輕輕將小室放入孔中。在放入時(shí)，建議將小室稍稍?xún)A斜，一側先接觸液面，以免垂直放入在小室下生成氣泡。之后便可將混合均勻的細胞懸液加入小室內部。

小室膜上既然有許多小孔，在包被基質(zhì)蛋白或一些單獨加液在上室的情況下，液體是否會(huì )很快漏至下室？

一般不會(huì )。小室的膜上的小孔孔徑有限，在表面張力的作用下，加入上室的包被液并不會(huì )很快漏下，如果短時(shí)間內發(fā)現有液體大量滴下，需檢查小室的膜是否有裂痕或不完整的情況。

共培養實(shí)驗中，上下室接種細胞的位置一般如何安排？

由于小室膜上小孔的存在，上下室的培養基可以交流互通，接種在上下室的細胞是相互影響的。接種細胞的位置安排需考慮收集細胞、進(jìn)行下游檢測的方便程度，同時(shí)也需要考慮到上下室培養面積的差異（上室的有效生長(cháng)面積比下室小，相應地，接種的細胞量恐怕有差異），您可參考相關(guān)文獻或進(jìn)行預實(shí)驗來(lái)最終決定實(shí)驗安排。

小室內接種的細胞可否消化收集？

可以的。您可采用在普通培養器皿中消化相應細胞的試劑（如胰酶等），在上下室均加入推薦體積的消化液。

對小室內接種的細胞進(jìn)行藥物處理時(shí)，藥物是僅需加入上室嗎？

由于小室膜上小孔的存在，我們建議您在上下室內均加入含有同樣濃度藥物的培養基，以確保您的藥物處理濃度。