新聞中心 產(chǎn)品資訊
全部資訊
細胞遷移和侵襲實(shí)驗堪稱(chēng)腫瘤研究、藥物開(kāi)發(fā)的“黃金搭檔”，但實(shí)驗翻車(chē)率也高居不下——細胞不“跑”、背景雜亂、結果難量化？
別慌！今天小特帶你解鎖科研神器細胞嵌入皿的正確打開(kāi)方式，從原理到實(shí)操細節，助你輕松通關(guān)！
1 什么是細胞嵌入皿
細胞嵌入皿是細胞實(shí)驗中的一種重要工具，嵌入皿被嵌入培養板內，形成上室與下室的結構，兩者分別填充上層與下層培養液，并由一層通透性多孔膜相隔。它通過(guò)膜技術(shù)模擬細胞的原始生長(cháng)環(huán)境，使得體外培養的細胞在形態(tài)和功能上更接近于體內生長(cháng)的細胞。這種技術(shù)特別適用于研究細胞對各種刺激（如生長(cháng)因子、趨化因子或細胞外基質(zhì)成分）的響應，包括遷移、趨化性和侵襲等現象。
2 遷移or侵襲？傻傻分不清楚
細胞嵌入皿對于評估細胞通過(guò)多孔膜遷移或侵襲的能力尤為重要，這種多孔膜模擬了細胞在體內必須穿越組織的條件，遷移或侵襲實(shí)驗常用孔徑為8μm。
◆遷移實(shí)驗（未添加基質(zhì)膠）
在遷移實(shí)驗中，細胞可以從上室直接遷移到下室，無(wú)需降解基質(zhì)膠或侵入膜。這一類(lèi)型的實(shí)驗旨在評估細胞對化學(xué)誘導劑等的響應，展示其遷移能力。
◆侵襲實(shí)驗（需添加基質(zhì)膠）
在侵襲實(shí)驗中，細胞必須先將涂覆在膜頂部的細胞外基質(zhì)（ECM）層降解掉，才能進(jìn)一步遷移到下室中，通過(guò)基質(zhì)膠的設置，增加了對細胞消化及穿透能力的考驗，從而更精確地模擬并評估細胞在生物體內的行為特性。
3 侵襲實(shí)驗拆解
操作步驟
DAY 1
實(shí)驗準備
1.觀(guān)察細胞生長(cháng)狀態(tài)，取生長(cháng)狀態(tài)良好的細胞去掉培養基，加入無(wú)血清培養基饑餓處理24h。
2.將基質(zhì)膠置于冰中并在4℃過(guò)夜融化，將24孔細胞嵌入皿、移液管或槍頭放入4℃預冷過(guò)夜。
DAY 2
鋪膠 / 鋪板
基質(zhì)膠鋪膠準備
3.稀釋基質(zhì)膠：在冰上，將基質(zhì)膠用無(wú)血清培養基稀釋至1mg/mL，使用預冷的吸頭混合至均勻狀態(tài)。
4.均勻鋪膠：取60μL上述混合溶液垂直加入嵌入皿中，使其均勻平鋪在底部，注意均勻鋪膠，不要產(chǎn)生氣泡。
5.凝膠：隨后置于37℃孵育2-4h聚合成薄膜，小心吸出未結合的基質(zhì)膠。
6.基底膜水化：加入100μL無(wú)血清培養基，將培養板置于37℃培養箱孵育30min，進(jìn)行水化。
細胞鋪板
7.去除嵌入皿中液體，檢查是否有液體穿過(guò)上室進(jìn)入到下室中，若沒(méi)有，則可用于接種細胞。
8.用無(wú)血清培養基配制樣本，建議將工作液濃度設置成終濃度的2倍。隨后按樣本：細胞懸液=1：1的比例加入到嵌入皿內。
9.取500μL含10%FBS的完全培養基加入24孔板下室，用鑷子將嵌入皿置于24孔板內。
10.消化饑餓后的細胞，用1mL無(wú)血清培養基重懸，進(jìn)行細胞計數，根據上室細胞接種數量調整細胞密度。
11.先加入50μL的樣本工作液，再加入50μL的細胞懸液，此時(shí)樣本濃度被稀釋2倍即為終濃度。
12.將24孔板置于37℃，5%CO2，90%濕度條件下培養24-48h。
DAY 3/4
細胞固定 / 染色
13.取出嵌入皿，去除培養液，在24孔板干凈的孔中加入600uL 4%多聚甲醛固定液，將小室放入孔中室溫固定15-30分鐘，棄固定液，PBS洗滌小室內外2-3次。
14.在24孔板干凈的孔中加入600uL結晶紫染色液，將小室放入孔中室溫染色8-10分鐘，棄染色液，PBS洗滌小室內外2-3次。
15.適當風(fēng)干或用棉簽擦干后，在顯微鏡下觀(guān)察。
16.用小鑷子小心揭下膜，底面朝上，適當風(fēng)干后，移至載玻片上用中性樹(shù)膠封片。在高倍顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察和拍照，隨機選取5個(gè)視野(上、下、中央、左、右各1個(gè))計數呈紫色的細胞，統計結果。
注：“非貼壁”細胞計數，由于某些細胞自身的原因或某些膜的關(guān)系，有時(shí)細胞在穿過(guò)膜后不能附著(zhù)在膜上，而是掉進(jìn)下室。這種情況下可以收集下層培養液，用流式細胞儀計數細胞量，也可用細胞計數的方法直接在鏡下計數。
結果示例
利用細胞嵌入皿檢測細胞的遷移和侵襲能力時(shí)，需要根據細胞特性選擇嵌入皿的孔徑，如下圖，在不同孔徑的PC膜嵌入皿中以相同密度接種HT22細胞，觀(guān)察其遷移情況：
圖：HT22細胞在不同孔徑嵌入皿的遷移情況
圖：HT22細胞的尺寸分布
結論：使用孔徑為8μm的PC膜嵌入皿時(shí)，HT22細胞表現出較好的遷移能力，且未有明顯的細胞遺漏、細胞在孔底貼壁等現象
4 實(shí)驗避坑指南
**細胞死活看仔細**
接種前檢測活性＞95%，死細胞會(huì )干擾背景
**趨化梯度別搞反**
下層培養基血清濃度或趨化因子必須高于上層
**基質(zhì)膠別成“攔路虎”**
基質(zhì)膠過(guò)厚或未完全固化會(huì )導致細胞無(wú)法穿透
**培養箱濕度要拉滿(mǎn)**
防止小室邊緣液體蒸發(fā)，破壞趨化梯度
**陰性對照不能少**
下層用無(wú)血清培養基，驗證細胞是否自發(fā)遷移
5 潔特生物細胞嵌入皿
* 規格：培養板（6孔、12孔、24孔）
培養皿（100mm）
* 類(lèi)型：懸掛式、插入式
* 膜孔徑：0.1μm、0.4μm、1.0μm、3.0μm、5.0μm、8.0μm、12.0μm
* 膜材質(zhì)：膜聚碳酸酯(PC)、聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)
* 表面處理：TC處理表面
6 細胞嵌入皿怎么選
潔特生物提供多種規格的細胞嵌入皿，以滿(mǎn)足不同實(shí)驗場(chǎng)景的需求。在選擇細胞嵌入皿時(shí)，以下幾個(gè)方面是需要考慮的關(guān)鍵因素：
01
規格
潔特生物細胞嵌入皿提供24孔、12孔、6孔培養板以及100mm培養皿等四種容器規格的產(chǎn)品。選擇時(shí)應根據細胞數量、實(shí)驗組別設置和實(shí)驗規模等條件來(lái)決定。
02
膜材質(zhì)
潔特生物細胞嵌入皿提供兩種高品質(zhì)膜材選擇，分別為PET膜與PC膜，二者均具備標準化的額定孔密度，可滿(mǎn)足不同實(shí)驗需求。
a) 聚對苯二甲酸乙二醇酯（PET）膜：擁有卓越的透光性能，能在顯微鏡下清晰呈現細胞狀態(tài)與細胞層的形成過(guò)程，是光鏡觀(guān)察、電鏡檢測以及免疫組化等實(shí)驗的不二之選。
b) 聚碳酸酯（PC）膜：細胞粘附性更強，可有效促進(jìn)跨膜物質(zhì)交換，尤其適用于組別較多、對細胞粘附與物質(zhì)交換要求較高的實(shí)驗場(chǎng)景
03
孔徑
潔特生物細胞嵌入皿提供0.1μm、0.4μm、1.0μm、3.0μm、5.0μm、8.0μm、12.0 μm等孔徑選擇，可參考下表選擇合適的孔徑。
7 細胞嵌入皿訂購信息
